هدف از تصفیه محصول PCR چیست؟

2024 نویسنده: Miles Stephen | [email protected]. آخرین اصلاح شده: 2023-12-15 23:35

تطهیر DNA از a PCR واکنش معمولاً برای استفاده پایین دست ضروری است و حذف آنزیم ها، نوکلئوتیدها، آغازگرها و اجزای بافر را تسهیل می کند. به طور سنتی این با استفاده از روش های استخراج آلی، مانند استخراج فنل کلروفرم، و به دنبال آن رسوب اتانول انجام می شد.

همچنین سوال این است که چرا خالص سازی محصولات PCR ضروری است؟

شما نیاز دارید محصولات PCR را خالص کنید برای خلاص شدن از شر پرایمرها، نوکلئوتیدها و آنزیم های استفاده نشده به منظور بهینه سازی موفقیت در بستن، که باعث حفظ و توالی یابی می شود. تولید - محصول از PCR . به خالص - تصفیه را محصولات PCR ، کروماتوگرافی حذف اندازه استفاده می شود.

علاوه بر این، پس از PCR چه کاری باید انجام دهم؟ برای به حداکثر رساندن بهبودی، فنجان نگهدارنده را دو بار با 10 تا 20 µL TE یا آب بشویید. آخرین PCR واکنش ممکن است حاوی حداکثر یک میکروگرم DNA تقویت شده باشد که می تواند برای انواع کاربردهای زیست شناسی مولکولی استفاده شود. این برنامه ها ممکن است کم و بیش به اجزای باقیمانده از حساس باشند PCR مخلوط واکنش

همچنین ممکن است پرسیده شود، چگونه محصولات PCR را تمیز می کنید؟

روش های کلاسیک مورد استفاده برای تمیز بالا محصولات PCR قبل از تعیین توالی شامل الکتروفورز ژل، رسوب اتانول، و کروماتوگرافی ستونی است. در حالی که بسیار موثر هستند، این روش ها می توانند به سرعت در هنگام پردازش چندین نمونه به صورت موازی و درجات مختلفی از از دست دادن نمونه، دست و پا گیر شوند.

چرا DNA باید تمیز شود؟

ما تمیز بالا DNA از محلول های آبی برای حذف نمک های بافر، آنزیم ها یا سایر موادی که می توانند بر کاربردهای پایین دستی تأثیر بگذارند. به عنوان مثال می توان به واکنش PCR اشاره کرد تمیز بالا، تمیز تا بعد از محدودیت هضم و تمیز از ژنومی یا پلاسمید DNA آلوده به پروتئین های سلولی / زباله